- Sephrose 2B柱纯化质粒DNA
- 用Sepharose 2B或Sepharose 4B进行纯化,该方法具有快速,条件温和,重复性好,载体物质可以再利用等优点,因而已广泛用于质粒DNA纯化...
- 作者：发表于：2007-12-19 13:39:00 点击：43 评论：0 查阅全文...
- 在质粒载体中进行平末端片段的克隆
- 1．分别设立两个反应，用适当的限制性内切核酸酶消化1~10g质粒DNA和外源DNA片段，使它们能产生平末端。 2．苯酚：氯仿抽提与乙醇沉淀法纯化出已被消化的载体和外源DNA片段。 3．分别用TE（pH 8.0）重新溶解纯化出的两种DNA沉淀，使终浓度为100 ng/ml。 假设1 bp相当于6...
- 作者：发表于：2006-08-17 14:31:36 点击：165 评论：0 查阅全文...
- 单克隆抗体克隆化技术
- 经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状...
- 作者：发表于：2006-08-17 14:30:14 点击：94 评论：0 查阅全文...
- 分子克隆常用载体
- 分子克隆常用载体 DNA片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造[地的。作为载体必须具备两条件：一是该载体在细胞内必须能自主复制，即必须具备复制原点；二是该载体必须具备适合的酶切位点，且这些酶切位点不在复制原点区...
- 作者：发表于：2006-08-17 14:29:20 点击：333 评论：0 查阅全文...
- 分子克隆常用技术
- 一、核酸的纯化 在分子克隆的所有操作中，最基本的操作是核酸的纯化。其关键步骤是去蛋白质，通常只要用酚/氯仿。氯仿抽提核酸的溶液即可。每当需要把克隆有某一些所用的酶灭活或去除以便进行下一步时，可进行这种抽提。然而，如要从细胞裂解液等复杂的分子混合物中纯...
- 作者：发表于：2006-08-17 14:27:44 点击：285 评论：0 查阅全文...
- 单克隆抗体技术：细胞的选择
- 脾细胞 1．材料 (1) 免疫过的血清抗体滴度高的Balb/c鼠。 (2) 1640培养液 (3) 2.5％FCS－1640营养液 2．操作方法 (1) 拉颈或用CO2处死小白鼠。 (2) 将小鼠放于70％酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在无菌条件下取脾。 (3) 把脾放入5ml含有2.5％FCS的1640液中，冰浴下...
- 作者：发表于：2006-08-17 14:26:43 点击：81 评论：0 查阅全文...
- 单克隆抗体技术：动物的选择与免疫
- 动物的选择 目前应用最广的是小白鼠和大白鼠，尤以小白鼠为好。就品系而言以Balb/c小白鼠应用最广，因为所有的小白鼠骨髓瘤系均从Balb/c小白鼠系诱导出来。Balb/c系小白鼠必须用纯系的，雌雄均可，以8~12周龄为宜。 大白鼠也可，能产生较多量的单克隆抗体。现在已经在...
- 作者：发表于：2006-08-17 14:25:59 点击：63 评论：0 查阅全文...
- 单克隆抗体技术：饲养层细胞
- 在体外的细胞培养中，单个的或数量很少的细胞不易生存与繁殖，必须加入其它活的细胞才能使其生长繁殖，加入的细胞称之为饲养细胞（Feeder cell）。在细胞融合和单克隆的选择过程中，就是在少量的或单个细胞的基础上使其生长繁殖成群体，因此在这一过程中必须使用饲养细...
- 作者：发表于：2006-08-17 14:25:10 点击：145 评论：0 查阅全文...
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