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PCR基础知识
增加PCR特异性
1、引物设计 细心地进行引物设计是PCR中最重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列。下面的指导描述了一个可以增加特异性的引物所具有的令人满意的特点: 1.典型的引物18到24个核苷长。引物...
作者:发表于:2006-08-18 08:55:25 点击:65 评论:0 查阅全文...
PCR常见问题总汇
PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性,不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板:...
作者:发表于:2006-08-18 08:54:28 点击:127 评论:0 查阅全文...
PCR佐剂手册
A variety of PCR additives and enhancing agents have been used to increase the yield, specificity and consistency of PCR reactions. Whilst these additives may have beneficial effects on some amplifications it is impossible to predict which agents wi...
作者:发表于:2006-08-18 08:53:35 点击:67 评论:0 查阅全文...
PCR技术的应用
一滴残留在裙子上的精液使得美国总统 BillClinton 不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是 PCR(Polymerasechainreaction)-- 聚合酶链式反应具有的特色之...
作者:发表于:2006-08-18 08:51:51 点击:97 评论:0 查阅全文...
PCR常见问题
PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性,不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板:...
作者:发表于:2006-08-18 08:50:33 点击:45 评论:0 查阅全文...
内切酶PCR反应中的活性
酶切反应条件如下:在20 l PCR产物混合体系中加入5U的内切酶,按相应的反应温度温育1小时。...
作者:发表于:2006-08-18 08:47:17 点击:72 评论:0 查阅全文...
如何建立一个PCR实验室?
为了对以个特定序列进行PCR做重复检测,需要三个不同的区域,每一个区域的具体技术操作和试剂在下面详细列出. 1、样品准备区 这个区域专门用作样品的准备,在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采 取预防措施: 1)PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作...
作者:发表于:2006-08-18 08:46:29 点击:44 评论:0 查阅全文...
PCR假阴性的原因分析
PCR的假阳性问题是在PCR诞生之初就被深刻认识到了,同时由于造成假阳性的因素相对单一,因此假阳性并不是困惑检验工作的主要原因。如果一个项目只是阳性率高敏感性好的话,那么可以认为其阴性结果具备很高的可排除性,仍然有相当的临床适用价值。但PCR的假阴性在检验工...
作者:发表于:2006-08-18 08:43:38 点击:39 评论:0 查阅全文...