返回首页

SDS-PAGE电泳时电泳条带不规则等几点问题

  

1). 电泳中,只有在恒压的条件下电泳期间蛋白质才可以保持恒定的迁移速率。
2). 电泳时出现不规则的迁移条带的原因多是电流不稳定。因此,要确保上下电泳槽中的电泳液与凝胶保持良好的接触。其他可能的原因包括:加样孔中加入的样品太多;样品中盐浓度太高;边缘效应。在凝胶边缘,迁移条带出现“微笑”状或样品迁移速度减慢,可能是因为凝胶的中间比两侧更热造成的,降低电压有助于改善这种情况。
3). 染色和脱色一般用最短的时间已足够。如果染色过夜,则需要更长的时间脱色。如果脱色后发现染色不彻底,还可以重新染色。
4). 非特异性的考马斯亮蓝染色主要是由于未溶解的染料沉积而成,应将染料溶液过滤后使用。
5). 样品缓冲液中煮沸的样品可以在-20℃保存数周,但是反复冻融会导致蛋白质降解。储存在-20℃的样品上样前,应该先使样品升温至室温,使得SDS沉淀溶解。
6). 样品不能沉到加样孔底部的原因是:sample loading buffer中没有足够量的甘油;或梳子安放不合适,使得加样孔底部留有聚合的丙烯酰胺。
7). 制样过程中,如果样品混合物变为黄色,说明溶液太酸,应加入NaOH调至蓝色,否则样品在电泳时会出现反常迁移。
8). 如果在4℃进行电泳,可以用十二烷基硫酸锂(LiDS)替代SDS,低温下LiDS不会沉淀。
9). 蛋白质条带的清晰与否取决于SDS的级别和品牌。
10). 丙烯酰胺有剧毒,可导致中枢神经麻痹,也可能有致癌或致畸变的作用。可被正常皮肤吸收。如果接触了丙烯酰胺粉末或溶液相,应立即用肥皂水冲洗。未聚合的丙烯酰胺应加入过量催化剂,以固体形式处理。

与SDS-PAGE相关的日志,下面几篇对你可能有用,请参考:

电泳 SDS-PAGE
相关参考
------分隔线----------------------------
推荐内容
关注微信
Ads