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凝胶过滤原理

  凝胶是一种多孔性的不带表面电荷的物质,当带有多种成分的样品溶液在凝胶内运动时,由于它们的分子量不同而表现出速度的快慢,在缓冲液洗脱时,分子量大的物质不能进入凝胶孔内,而在凝胶间几乎是垂直的向下运动,而分子量小的物质则进入凝胶孔内进行“绕道”运行,这样就可以按分子量的大小,先后流出凝胶柱,达到分离的目的。
具有分子筛作用的物质很多,如浮石、琼脂、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝胶等。以葡聚糖凝胶应用最广,商品名是sephadex型号很多,从G10到G200,它的主要应用范围是:①分级分离各种抗原与抗体;②去掉复合物中的小分子物质。如除盐、荧光素和游离的放射性同位素以及水解的蛋白质碎片;③分析血清中的免疫复合物;④分子量的测定。
葡聚糖凝胶的种类与性能
葡聚糖又名右旋糖酐,在它们的长链间以三氯环氧丙烷交联剂交联而成。葡聚糖凝胶具有很强的吸水性,交联度大,吸水性小,相反交联度小,吸水性大。商品名以SephadexG表示,G值越小,交联度越大,吸水性越小,G值越大,交联度越小,吸水性就越大,二者呈反比关系,G值大约为吸水量的10倍。由此可以根据床体积而估算出葡聚糖凝胶干粉的用量。
表Sephadex1的种类与特性:
型号
 分离范围 (分子量)
 吸水量 (ml/g)
 最小溶胀时(h) 20℃~25℃ 100℃
 床体积(ml)/干凝胶(mg)
 
G10
 
<700
 
1.0±0.1
 
31
 
2~3
 
G15
 
<1 500
 
1.5±0.2
 
31
 
2.5~3.5
 
G25
 
<5 000
 
2.5±0.2
 
31
 
4~6
 
G50
 
1500~20 000
 
8.0±0.3
 
31
 
9~11
 
G75
 
3 000~70 000
 
7.5±0.5
 
241
 
12~15
 
G100
 
4 000~15 000
 
10.0±1.0
 
721
 
15~20
 
G150
 
5 000~800 000
 
15.0±1.5
 
721
 
20~30
 
G200
 
5 000~300 000
 
20.0±2.0
 
721
 
30~40

G25、G50有四种颗粒型号:粗(100μ~300μ)、中(50μ~150μ)、细(20μ~80μ)和超细(10μ~40μ)。G75~G200又有两种颗粒型号:中(40μ~120μ),超细(10μ~40μ)。颗粒越细,流速越慢,分离效果越好。
DEAE-纤维素与Sephadex1比较:
项目 DEAE Sephadex
交换量
较大
非特异性吸附
较大
分离纯度 较好
分离时间 较粗 较长
应用范围 较窄 较宽
预处理 繁琐 方便
相关参考
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