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  • 蛋白质印迹的实验原理、方法与步骤 日期:2016-07-31 11:16:44 阅读:253

    实验原理 Western Blot(蛋白质印迹或免疫印迹)技术,以蛋白质为检测对象,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)将样品蛋白质分离,再转移到固相载体(PVDF尼龙膜或NC膜)上;固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且保持电泳分离...

  • 免疫印迹(Western Blotting)的基本原理及应用 日期:2016-02-17 14:34:35 阅读:272

    免疫印迹是一个用于蛋白质分析的常规技术,在电场的作用下将电泳分离的蛋白从凝胶转移至一种固相支持物,然后利用抗原-抗体的特异性反应,从蛋白混合物中检测出目标蛋白,从而定量或定性的确定正常或实验条件下细胞或组织中目标蛋白的表达情况。Westernblotting还可用...

  • Western Blot中抗体相关的问题 日期:2016-02-17 14:24:29 阅读:182

    1、做细胞信号传导,要做磷酸化某因子Western Blot,其二抗有何要求? 解答:对二抗无要求,要看你实验条件来选择,一般推荐用HRP标记的二抗。 2、同一公司的不同抗体用某个稀释度对一种抗体效果好,另外一种抗体可不可以用同种稀释度进行稀释? 解答:不同抗体,即使...

  • Protocol:Western Blotting 日期:2016-02-17 14:15:51 阅读:99

    Western Blot theory overview Similar to ELISAs, western blot uses antibodies to detect and analyze specific proteins in a given sample of tissue or cell extract. This technique uses gel electrophoresis to separate a mixture of proteins, followed by...

  • Cell Lysis and Western Immunoblotting Protocol 日期:2016-02-17 14:15:15 阅读:106

    WB——蛋白质印迹法IHC 1. Solutions and Reagents 1.1. 1X Phosphate Buffered Saline (PBS) 10-fold diluted 10X PBS buffer (which contains 0.58 M sodium phosphate dibasic (Na2HPO4), 0.1 M sodium phosphate monobasic (NaH2PO4), and 0.68 M NaCl, pH 7.4) 1....

  • Western blotting知识问答 日期:2016-02-17 14:14:32 阅读:212

    WesternBlotting一般用于什么样的实验? Westernblotting是一个用于蛋白质分析的常规技术,它可以从蛋白混合物中检测出目标蛋白,从而半定量或定性(无法绝对定量)的确定正常或实验条件下细胞或组织中目标蛋白的表达情况。 另外,Westernblotting还可用于蛋白-蛋白、...

  • Western Blotting 各种问题及解决办法 日期:2016-02-17 14:13:55 阅读:151

    问题 可能原因 可能采取的措施 背景高且均一 1. 抗体浓度过高 降低抗体(一抗 / 二抗)浓度 2. 封闭液选择不当 比较不同封闭液 3. 封闭不完全 根据不同的体系优化封闭液 提高封闭物浓度 优化封闭时间和(或)温度,室温下至少 1 小时或 4 ℃过夜 在封闭液中添加终浓度...

  • Western blot阴性怎么办? 日期:2016-02-17 14:13:07 阅读:197

    Western blot是最常用的实验方法,但意义并不寻常,其结果的有无往往决定着下一步实验的走向。当您辛辛苦苦地花费近两天时间提蛋白、电泳、转...

  • Western Blot的基本原理及操作流程 日期:2016-02-17 14:08:22 阅读:155

    【实验原理】 一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志,检测蛋白质的方法很多,除ELISA法外,也可用与检测DNA和RNA相类似的吸印方法。前两法有“南”和“北”之意,故本法遂被延伸称为Western(西)印迹法,该法能用...

  • Western Blot实验中滤纸、胶和膜的问题 日期:2016-02-17 14:07:31 阅读:479

    1、NC膜、PVDF膜、尼龙膜怎样鉴别? 解答:尼龙膜是较理想的核酸固相支持物,有多种类型;硝酸纤维素(NC)膜是目前应用最广的一种固相支持物,价格最便宜;PVDF膜介于二者之间。 就结合能力而言:尼龙膜结合DNA和RNA能力可达480-600μg/cm 2 ,可结合短至10bp的核酸...

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